トランスフェクションは、外来核酸の細胞への導入を可能にする分子生物学の重要な技術であり、研究者が遺伝子機能、タンパク質発現、および細胞シグナル伝達経路を研究できるようにします。ヒト神経芽細胞腫細胞株であるTET-213細胞は、神経特性のために神経科学研究で一般的に使用されています。このブログ投稿では、TET-213セルを効果的に伝達する方法に関するいくつかの洞察を共有し、TET-213セルサプライヤーとしての私の経験に基づいています。
TET-213細胞の理解
トランスフェクションプロセスを掘り下げる前に、TET-213細胞の特性を理解することが重要です。これらの細胞は、ヒト神経芽細胞腫に由来し、神経突起を拡張し、神経マーカーを発現する能力などのニューロンの特徴を示します。それらは、標準的な細胞培養条件でよく成長する付着細胞であり、通常は胎児のウシ血清（FBS）と抗生物質を補充した培地で成長します。
適切なトランスフェクション方法を選択します
セルをトランスフェクトするために利用できるいくつかの方法があり、それぞれに独自の利点と制限があります。トランスフェクション法の選択は、トランスフェクトする核酸の種類、細胞型、および望ましいトランスフェクション効率など、さまざまな要因に依存します。 TET-213細胞に適したいくつかの一般的なトランスフェクション方法を次に示します。
脂質ベースのトランスフェクション
脂質ベースのトランスフェクションは、細胞に核酸を導入するための最も広く使用されている方法の1つです。これには、核酸と複合体を形成する脂質ベースの試薬の使用が含まれ、エンドサイトーシスを介して細胞によって取り込まれます。脂質ベースのトランスフェクションは比較的簡単に実行でき、TET-213細胞を含む多くの細胞タイプで高いトランスフェクション効率を達成できます。
エレクトロポレーション
エレクトロポレーションは、電界を使用して細胞膜に一時的な毛穴を作成する物理的方法であり、核酸が細胞に入ることができます。この方法は、一次細胞などの他の方法を使用してトランスフェクトするのが困難な細胞をトランスフェクトするのに特に役立ちます。ただし、エレクトロポレーションは細胞により損傷を与える可能性があり、高いトランスフェクション効率を実現するためにエレクトロポレーションパラメーターの最適化が必要になる場合があります。
ウイルス形質導入
ウイルス形質導入には、ウイルスベクターを使用して細胞に核酸を送達します。ウイルスベクターは、望ましい核酸を運ぶように設計されたウイルスに由来し、細胞に効率的に感染する可能性があります。ウイルス形質導入は高いトランスフェクション効率を達成することができ、TET-213細胞を含む広範囲の細胞タイプをトランスフェクトするために使用できます。ただし、ウイルス形質導入には特殊な機器と専門知識が必要であり、ウイルスベクターの使用に関連する潜在的な安全性の懸念があります。
トランスフェクションのために細胞を準備します
適切な細胞調製は、トランスフェクションを成功させるために不可欠です。トランスフェクションのためにTET-213細胞を準備する際に従うべきいくつかの手順を以下に示します。
細胞培養
FBSと抗生物質を補充した適切な細胞培養培地でTET-213細胞を維持します。セルを定期的に通過して、指数関数的な成長段階を維持します。貧弱な生理学的状態の細胞はトランスフェクション効率が低い可能性があるため、トランスフェクションのために健康で活発に成長している細胞を使用することが重要です。
細胞播種
適切な密度で培養皿またはマルチウェルプレートにTET-213細胞をシードします。シード密度は、トランスフェクション法と実験の種類に依存します。脂質ベースのトランスフェクションの場合、50〜80％の播種密度が通常推奨されます。
細胞インキュベーション
シード細胞を37°Cの加湿インキュベーターで5％CO2で少なくとも24時間、トランスフェクションの24時間インキュベートして、細胞が播種プロセスから取り付けて回復します。
トランスフェクションの実行
細胞が準備されたら、トランスフェクションを実行する時が来ました。 TET-213細胞の脂質ベースのトランスフェクションの一般的なプロトコルは次のとおりです。
トランスフェクション試薬を準備します
製造業者の指示に従って、脂質ベースのトランスフェクション試薬を準備してください。通常、これには、適切なトランスフェクション培地で試薬を希釈することが含まれます。
核酸を調製します
プラスミドDNAやsiRNAなど、トランスフェクトする核酸を調製します。適切なトランスフェクション培地で核酸を希釈します。
トランスフェクションコンプレックスを形成します
希釈したトランスフェクション試薬と希釈核酸をチューブに混ぜ、室温で15〜30分間インキュベートして、トランスフェクション複合体の形成を可能にします。
トランスフェクション複合体をセルに追加します
培地を細胞から除去し、新鮮なトランスフェクション培地に置き換えます。トランスフェクションコンプレックスをセルにドロップワイズに加え、プレートを静かに渦巻かせて複合体を均等に分配します。
細胞をインキュベートします
核酸の種類と実験に応じて、適切な時間、5％CO2で加湿インキュベーターのトランスフェクトされた細胞を37°Cの加湿インキュベーターでインキュベートします。プラスミドDNAトランスフェクションの場合、24〜48時間のインキュベーション時間は通常、遺伝子発現を可能にするのに十分です。
トランスフェクション効率の評価
トランスフェクションの後、トランスフェクションの効率を評価して、トランスフェクションが成功したかどうかを判断することが重要です。以下を含む、トランスフェクションの効率を評価するために利用できるいくつかの方法があります。
蛍光顕微鏡
トランスフェクトされた核酸がGFPなどの蛍光タンパク質をコードする場合、蛍光顕微鏡を使用してトランスフェクトされた細胞を視覚化できます。蛍光細胞の割合は、トランスフェクション効率の推定として使用できます。
フローサイトメトリー
フローサイトメトリーを使用して、蛍光マーカーまたは細胞表面抗原の発現に基づいてトランスフェクト細胞の割合を定量化できます。この方法は、蛍光顕微鏡と比較して、トランスフェクション効率のより正確かつ定量的な尺度を提供します。
ウエスタンブロッティングまたはQPCR
トランスフェクトされた核酸が目的のタンパク質をコードする場合、ウエスタンブロッティングまたはQPCRを使用して、タンパク質またはmRNAレベルでそれぞれタンパク質の発現を検出できます。この方法は、遺伝子発現のレベルとトランスフェクトされたタンパク質の機能に関する情報を提供できます。
一般的なトランスフェクションの問題のトラブルシューティング
トランスフェクションは困難な場合があり、発生する可能性のあるいくつかの一般的な問題があります。一般的なトランスフェクションの問題に関するトラブルシューティングのヒントを次に示します。
低いトランスフェクション効率
- 核酸の品質と量を確認してください。核酸が純粋で高品質であることを確認してください。
- トランスフェクション試薬濃度、核酸とリアージャーの比、およびインキュベーション時間などのトランスフェクション条件を最適化します。
- 細胞の健康と生存率を確認してください。トランスフェクションの前に細胞が健康で積極的に成長していることを確認してください。
- 別のトランスフェクション方法または試薬を試してください。
細胞毒性
- トランスフェクション試薬または核酸の濃度を減らします。
- トランスフェクション条件を最適化して、細胞の損傷を最小限に抑えます。
- 細胞に対する毒性が低い別のトランスフェクション法または試薬を使用します。
可変トランスフェクション効率
- 細胞が均等に、適切な密度で播種されていることを確認してください。
- セルに追加する前に、トランスフェクション複合体を徹底的に混ぜます。
- 一貫した条件下で細胞をインキュベートして、変動性を最小限に抑えます。
結論
TET-213細胞をトランスフェクトすることは、挑戦的だがやりがいのあるプロセスになる可能性があります。適切なトランスフェクション方法を選択し、細胞を適切に準備し、適切なプロトコルに従って、高いトランスフェクション効率を達成し、信頼できる結果を得ることができます。質問がある場合、またはTET-213細胞のトランスフェクションに関するさらなる支援が必要な場合は、お気軽にお問い合わせください。私たちはTET-213細胞の大手サプライヤーであり、高品質の細胞、トランスフェクション試薬、および技術サポートを提供できます。
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参照
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