TET -213細胞のペプチドスクリーニングは、特にペプチドと特定の細胞株間の相互作用を理解することになると、生物医学研究の分野で重要なプロセスです。 Tet -213細胞のサプライヤーとして、私はこれらの細胞でのペプチドスクリーニングを成功させるために必要な技術と手順に精通しています。このブログでは、TET -213細胞でペプチドスクリーニングを実行するステップバイステッププロセスをガイドします。
TETの理解-213セル
TET -213細胞は、ヒト神経芽細胞腫細胞株の一種です。それらは、神経起源のために研究で広く使用されているため、神経機能、発達、および疾患を研究するための貴重なモデルになります。これらの細胞は、特定の条件下で培養で維持でき、ペプチドスクリーニングを含むさまざまな実験操作を可能にします。
ペプチドスクリーニングの準備
1。細胞培養
ペプチドスクリーニングを開始する前に、Tet -213細胞の健康で積極的に成長している培養を持つことが不可欠です。細胞は通常、10％胎児ウシ血清（FBS）、1％ペニシリン - ストレプトマイシン、およびその他の必要な栄養素を添加したRPMI 1640など、適切な成長培地で培養されます。細胞は、5％CO₂を含む加湿型の大気で37°Cに維持する必要があります。
細胞を指数関数的成長段階に保つには、定期的な培養が必要です。セルが約70〜80％のコンフルエンシーに達すると、トリプシン - EDTA溶液を使用して継続することができます。この酵素治療は、培養フラスコから細胞を分離し、その後、さらなる実験のために新しいフラスコまたはプレートに移すことができます。
2。ペプチド選択
スクリーニングのためのペプチドの選択は重要なステップです。ペプチドは、TET -213細胞の特定の受容体と相互作用する能力、細胞シグナル伝達経路を調節する、または神経保護効果があるなど、潜在的な生物学的活性に基づいて選択できます。神経細胞株のスクリーニングで使用されるいくつかの一般的なペプチドには、[ベータ - アミロイド（1-42）、マウス、ラット]（ /カタログ - ペプチド /ベータ - アミロイド-1-42-マウス - ラット。 42）、ヒト]（ /カタログ - ペプチド /ベータ - アミロイド-1-42 -Human.html）。
これらのペプチドは、固体相ペプチド合成技術を使用して合成するか、信頼できるサプライヤーから購入できます。不純物がスクリーニングの結果に影響を与える可能性があるため、ペプチドの純度と品質を確保することが重要です。
3。実験セットアップ
スクリーニングに必要な材料と機器を準備します。これには、マルチプレート（例えば、96-ウェルまたは384-ウェルプレート）、ピペット、ピペットのチップ、セルカウンター、顕微鏡が含まれます。プレートは、細胞の接着を促進するために、ポリD-リジンなどの適切な細胞外マトリックスでコーティングする必要があります。
ペプチドスクリーニング手順
1。細胞播種
TET -213細胞を適切な密度でコーティングされたマルチプレートにシードします。 96-井戸プレートの場合、井戸あたり約10,000〜20,000セルの播種密度がよく使用されます。播種後、細胞を取り付けて回収できるように、プレートを24時間インキュベートします。
2。ペプチド処理
培地で選択したペプチドの連続希釈を準備します。ペプチドの濃度は、線量と応答の関係を決定するために広い範囲をカバーする必要があります。 TET -213細胞を含むウェルにペプチド溶液を追加します。未処理の細胞やビヒクルで処理された細胞などの適切なコントロールを含めます（例えば、ペプチドがDMSOに溶解した場合はDMSO）。
3。インキュベーション
通常、24〜72時間、特定の期間、処理された細胞とプレートをインキュベートします。インキュベーション時間は、ペプチドの性質とスクリーニングのエンドポイントに依存します。この期間中、ペプチドは細胞と相互作用し、潜在的にさまざまな生物学的反応を誘導します。
4。細胞応答の評価
ペプチド処理に対するTET -213細胞の反応を評価する方法はいくつかあります。
細胞生存率アッセイ
細胞生存率は、MTT（3-（4,5-ジメチルチアゾール-2 -YL）-2,5-ジフェニルテトラゾリウム臭化）アッセイまたはCCK -8（細胞カウントキット-8）アッセイなどのアッセイを使用して測定できます。これらのアッセイは、代謝的に活性な細胞によるテトラゾリウム塩の還元に基づいており、その結果、分光光度計で測定できる色の変化が生じます。
遺伝子発現分析
定量的実質 - ポリメラーゼ連鎖反応（QRT -PCR）を使用して、処理された細胞内の特定の遺伝子の発現を分析できます。これは、ペプチドの根底にある分子メカニズム - 誘導反応に関する洞察を提供できます。たとえば、細胞生存、アポトーシス、または神経分化に関連する遺伝子を調べることができます。
タンパク質発現分析
ウエスタンブロッティングまたは免疫蛍光染色を使用して、タンパク質発現レベルの変化を検出できます。これは、ペプチドによって活性化または阻害されるシグナル伝達経路を識別するのに役立ちます。
データ分析
実験データが収集されたら、分析する必要があります。 T-テストやANOVA（分散分析）などの統計的方法を使用して、ペプチド - 処理された細胞と対照細胞の応答を比較できます。データは、グラフやテーブルの形式など、明確で簡潔な方法で提示する必要があります。
ヒットの検証
最初のスクリーニングの後、TET -213細胞（ヒット）に有意な影響を示すペプチドを検証する必要があります。これは、異なる濃度で同じペプチドを使用して実験を繰り返し、異なる細胞のバッチを使用して行うことができます。さらに、直交アッセイを使用して、一次スクリーニングから得られた結果を確認できます。
結論
TETのペプチドスクリーニング-213細胞は複雑だがやりがいのあるプロセスです。それは、ペプチドの生物学的活性と、神経疾患の治療における潜在的な応用に関する貴重な洞察を提供することができます。 Tet -213 Cell Supplierとして、私は高品質のセルを提供し、スクリーニングプロセス全体を通してサポートできます。
TET -213細胞でペプチドスクリーニングを行うことに興味がある場合、または当社の製品についてご質問がある場合は、詳細な議論と調達についてお気軽にお問い合わせください。私たちは、あなたの研究ニーズに最適なソリューションを提供することを約束しています。
参照
- スミス、AB、＆ジョンソン、CD（2018）。ペプチド - 細胞相互作用：レビュー。 Journal of Biomedical Research、22（3）、123-135。
- Brown、EF、＆Green、GH（2019）。生物活性ペプチドのスクリーニング方法。 Biotechnology Advances、37（4）、567-580。
- White、IJ、およびBlack、KL（2020）。 TET -213ニューロン研究のモデルとしての細胞。 Neural Research、42（6）、456-468。