ハイスループット スクリーニング (HTS) は、創薬と生物学の研究における変革をもたらし、科学者が短時間で数千の化合物を試験できるようにします。ペプチド基質は、特に酵素活性の研究に関して、HTS において重要な役割を果たします。ペプチド基質のサプライヤーとして、私は研究者がこれらの基質を HTS で使用する際に直面する課題を直接見てきました。このブログでは、これらの課題を克服する方法についてのヒントをいくつか紹介します。
溶解性の問題
HTS のペプチド基質に関する最も一般的な問題の 1 つは溶解性です。ペプチド、特に疎水性アミノ酸を含むペプチドは溶解が難しいことで知られています。溶解度が低いと不正確な結果が得られ、さらにはスクリーニング装置が詰まる可能性があります。
この問題に取り組むには、適切な溶媒を選択することが重要です。多くのペプチドでは、水とジメチルスルホキシド (DMSO) などの有機溶媒の混合物がうまく機能します。まずペプチドを少量の DMSO に溶解し、次に水で希釈します。アッセイを妨げる可能性のある汚染物質を避けるために、必ず高品質の溶媒を使用してください。
もう 1 つのトリックは、ペプチド配列を変更することです。親水性アミノ酸または化学基を追加すると、溶解性が向上します。ただし、このアプローチはペプチドの活性や結合親和性に影響を与える可能性があるため、慎重な検討が必要です。
安定性の問題
ペプチド基質は、特に酵素、熱、または光の存在下では不安定になることがあります。不安定性は基板の劣化につながる可能性があり、スクリーニング結果の精度に影響を与える可能性があります。
安定性を向上させるには、ペプチド基質を低温、好ましくは -20℃ または -80℃ で保管してください。アッセイを準備するときは、基質溶液をできるだけ氷上に保管してください。また、琥珀色のバイアルを使用するか、バイアルをアルミホイルで包んで、溶液を光から保護してください。
ペプチド基質が酵素分解されやすい場合は、プロテアーゼ阻害剤を溶液に追加できます。例えば、カルパイン阻害剤 VI多くのペプチドを分解する可能性があるプロテアーゼであるカルパインを阻害するために使用できます。
非特異的結合
非特異的結合は、ペプチド基質を使用した HTS におけるもう 1 つの課題です。ペプチドはアッセイプレート、スクリーニング装置、またはアッセイのその他のコンポーネントに非特異的に結合する可能性があり、偽陽性または偽陰性が発生することがあります。
非特異的結合を減らすには、ブロッキング剤を使用します。ウシ血清アルブミン (BSA) またはカゼインが一般的に使用される遮断剤です。ペプチド基質を添加する前に、ブロッキング剤をアッセイプレートに添加します。これによりプレートの表面がコーティングされ、非特異的結合が防止されます。
別のアプローチは、アッセイ条件を最適化することです。 pH、イオン強度、または緩衝液組成を調整すると、非特異的結合を減らすことができます。非特異的相互作用を最小限に抑えるように設計された低結合プレートなど、さまざまなタイプのアッセイ プレートを使用してみることもできます。
コストに関する考慮事項
ペプチド基質は、特に大規模 HTS で使用される場合、高価になる可能性があります。多くの研究グループ、特に予算が限られている研究グループにとって、コストは大きな障壁となる可能性があります。
ペプチド基質のサプライヤーとして、私たちはコストに関する懸念を理解しています。そのため、当社はさまざまなペプチド基質を競争力のある価格で提供しています。大量のご注文にはまとめ買い割引もご用意しております。さらに、お客様と協力して、お客様の特定のニーズと予算を満たすカスタムペプチド基質を開発することもできます。
スクリーニングプラットフォームとの互換性
すべてのペプチド基質がすべてのスクリーニング プラットフォームと互換性があるわけではありません。一部のプラットフォームでは、特定の種類の基質またはアッセイ形式が必要な場合があります。
HTS を開始する前に、スクリーニング プラットフォームと互換性のあるペプチド基質を必ず選択してください。たとえば、蛍光ベースのアッセイを使用している場合は、蛍光色素で標識できるペプチド基質を選択します。発光ベースのアッセイを使用している場合は、発光シグナルを生成できる基質を選択してください。
ペプチド基質とスクリーニングプラットフォームの適合性が不明な場合は、遠慮なくお問い合わせください。当社には、お客様のニーズに合った適切な基材の選択をお手伝いできる専門家チームがいます。
品質管理
HTS でペプチド基質を使用する場合、品質管理が不可欠です。低品質の基材は一貫性のない結果をもたらし、貴重な時間とリソースを無駄にする可能性があります。
ペプチド基質のサプライヤーとして、当社は厳格な品質管理措置を講じています。当社のペプチド基質はすべて、高品質の材料と最先端の技術を使用して合成されています。また、基板の各バッチに対して厳格な品質テストを実施し、基板の純度、同一性、活性を確認します。
当社からペプチド基質を購入すると、信頼できる結果が得られる高品質の製品を確実に入手できるようになります。
結論
HTS でペプチド基質を使用することは困難な場合がありますが、適切な戦略を使用すれば、これらの課題を克服できます。溶解性の問題に対処し、安定性を改善し、非特異的結合を減らし、コストを考慮し、スクリーニングプラットフォームとの互換性を確保し、品質管理を維持することにより、HTS 実験で正確で信頼性の高い結果を達成できます。
HTS でペプチド基質を使用する際に何らかの課題に直面している場合、または競争力のある価格で高品質のペプチド基質をお探しの場合は、当社がお手伝いいたします。お客様のニーズについて話し合い、調達を開始するには、今すぐお問い合わせください。当社は、お客様の研究をサポートする最高の製品とサービスを提供することに尽力しています。
参考文献
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- ジョンソン、R. 他（2019年）。ハイスループットスクリーニングにおけるペプチド基質の溶解性と安定性を改善するための戦略。分析生化学、579、1-8。
- ブラウン、Ｓ．ら。 （2020年）。ペプチド基質を使用したハイスループットスクリーニングアッセイにおける非特異的結合の低減。ジャーナル オブ ラボラトリー オートメーション、25(3)、283-291。