カタログペプチドはどのように定量化されますか?
ちょっと、そこ！私はカタログペプチドのサプライヤーですが、今日はこれらのペプチドをどのように定量化するかについてお話したいと思います。ペプチドは研究から医療まであらゆる分野で非常に重要であり、正確な定量を取得することが非常に重要です。
まず最初に、なぜカタログペプチドを定量する必要があるのかについて話しましょう。研究者や医療分野の人々がペプチドを使用する場合、どれだけのペプチドを扱っているかを正確に知る必要があります。実験室での実験、臨床試験、新薬の開発のいずれであっても、正確な量が重要です。使用量が少なすぎると結果が正確でない可能性があり、使用量が多すぎると全体が台無しになる可能性があります。
では、どうすればよいでしょうか?いくつかの異なる方法がありますので、詳しく説明します。
最も一般的な方法の 1 つは、UV - Vis 分光法です。この方法は、ペプチドが特定の波長の紫外線および可視光を吸収するという事実を利用しています。トリプトファン、チロシン、フェニルアラニンなどのアミノ酸には、特定の吸収特性があります。ペプチドの溶液を通して特定の波長の光を照射すると、その光がどれだけ吸収されるかを測定できます。吸収値とペプチドの既知の吸光係数 (アミノ酸組成に関連する) に基づいて、溶液中のペプチドの濃度を計算できます。たとえば、トリプトファンを多く含むペプチドがある場合、約 280 nm の光をより多く吸収します。ビール - ランバートの法則に基づいた簡単な式を使用して濃度を計算します。これは比較的迅速で簡単な方法ですが、いくつかの制限があります。ペプチド溶液中の汚染物質も同じ波長の光を吸収する可能性があり、測定値が狂う可能性があります。
もう 1 つの一般的な方法は、ブラッドフォード アッセイです。これは、Coomassie Brilliant Blue G-250 と呼ばれる色素に依存する比色アッセイです。この色素がペプチドに結合すると、色が変わります。その後、特定の波長 (通常は約 595 nm) で着色された溶液の吸光度を測定できます。色の変化の量は、溶液中のペプチドの量に比例します。既知の濃度の参照ペプチドを使用して標準曲線を作成し、未知のペプチドサンプルの吸光度をその曲線と比較して濃度を決定します。ブラッドフォード アッセイは非常に高感度ですが、洗剤や塩など、サンプル中の特定の物質の影響を受ける可能性があります。
HPLC (高速液体クロマトグラフィー) もペプチドの定量に広く使用されています。 HPLC では、疎水性などの化学的特性に基づいて、ペプチドをサンプル内の他の成分から分離します。固定相を満たしたカラムにペプチド溶液を注入し、移動相 (液体溶媒) を使用してペプチドをカラムに押し込みます。異なるペプチドは異なる速度でカラムを通過し、検出器 (通常は UV 検出器) を使用してカラムから出てくるペプチドを検出できます。対象のペプチドのピーク面積を既知の標準のピーク面積と比較することにより、その濃度を計算できます。 HPLC は、複雑な混合物中でもペプチドを分離して定量できるため優れていますが、少し時間がかかり、特殊な装置が必要です。
ここで、当社が提供するカタログペプチドのいくつかについて少しお話しましょう。取るエンテロ-ヒランバンチン例えば。このペプチドを定量する場合、最も正確な結果を得るためにこれらの方法を組み合わせて使用します。まず紫外可視分光法を使用して濃度の大まかな推定値を取得し、次に HPLC で再確認します。このようにして、サンプル内の潜在的な汚染物質や干渉を考慮することができます。
もう一つは、E[c(RGDyK)]2。このペプチドにはいくつかのユニークな特性があるため、定量する際には特に注意する必要があります。 Bradford アッセイは、その特定のアミノ酸組成のため、ここでは最良の選択ではない可能性があるため、HPLC および UV-Vis 分光法をより信頼しています。
そして、マズドゥチド (Lys20(N₃-CH₂CO-))。これはより複雑なペプチドであり、複数段階のアプローチを使用します。まず UV - Vis を使用して初期読み取り値を取得し、次に HPLC を使用して不純物から分離し、より正確な定量を取得します。
私たちの会社では、品質管理が非常に重要です。カタログペプチドを定量する際には、必ず厳格なプロトコルに従うようにしています。各バッチに対して複数のテストを実行し、その結果を認定標準物質と比較して精度を保証します。また、当社はすべての定量データの詳細な記録を保管しているため、お客様は購入するペプチドに完全な自信を持っていただけます。
高品質のカタログペプチドを市場に投入しており、正確な定量化が必要な場合は、当社がお手伝いいたします。次の大規模実験用のペプチドを探している研究者であっても、新薬を開発中の製薬会社であっても、当社は必要なペプチドを取り揃えています。当社の専門家チームは、当社の製品または定量化プロセスに関するご質問にいつでもお答えいたします。したがって、ペプチドのニーズについて遠慮せずに連絡して会話を始めてください。私たちは、お客様のプロジェクトに最適なソリューションを見つけるために、お客様と協力する準備ができています。
参考文献
- スコープス、RK (1994)。タンパク質精製: 原理と実践。スプリンガー。
- DA スクーグ、DM ウェスト、FJ ホラー、SR クラウチ (2013)。分析化学の基礎。センゲージ学習。
- Bollag, DM、Rozycki, MD、および Edelstein, SJ (1996)。プロテインメソッド。ワイリー - リス。